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珀金埃尔默高内涵系统助力中国科学家新冠肺炎研究
发布时间：2020-04-28 16:45 | 点击次数：565
厦门大学公共卫生学院夏宁邵、张天英团队，与厦门大学附属第一医院李志勇团队、中国疾病预防控制中心黄保英团队联合研究，基于 VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 假病毒和 ACE2 过表达 BHK21 细胞构建了一套稳定的中和评价体系。本月初，该研究论文发表在预印本平台 bioRxiv 上。
本研究对携带 SARS-CoV-2 全长或截短 S 蛋白的 G 蛋白缺陷型水泡性口炎病毒 (VSVdG) 的假病毒包装效率以及不同细胞系用于假型病毒包装和感染的效率进行了评价。研究发现，VSV-SARS-CoV-2-Sdel18（C 末端截短 18 个氨基酸的 S 蛋白）的病毒包装和感染效率远高于 VSV-SARS-CoV-2-S。而在本研究所使用的细胞系中，稳定表达人 ACE2 的 BHK21-hACE2 对感染最敏感，Vero-E6 对感染也有中等程度的敏感性，BHK21 细胞对假病毒几乎不敏感。基于 VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 假病毒和 ACE2 过表达 BHK21 细胞 (BHK21-hACE2)，建立了抗体筛选和验证的中和分析模型。通过对 EGFP 阳性的细胞进行计数指征假病毒的感染情况，从而保证了高通量检测能力。研究表明，用 VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 假病毒法测定 19 例恢复期患者血清中和效价，与 SARS-CoV-2 活病毒法测定结果有较好的相关性。同时评价了 7 种抗 SARS-CoV-2-S 受体结合区 (RBD) 中和小鼠单克隆抗体 (mAbs) 的中和活性。该模型的高效性可助力针对 SARS-CoV-2 的新药和疫苗研发。
Opera Phenix 系统作为本研究中的影像学数据采集和分析的工具，保障了模型的通量和筛选效率。
不同细胞系假病毒感染效率比较。比较携带 SARS-CoV-2 S 蛋白或 VSV G 蛋白的 VSVdG 病毒在 Vero-E6、BHK21、293T 和 BHK21-hACE2 细胞系中的感染效率。
VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 在不同细胞系中的包装效率比较。A 图左为各细胞感染 VSVdG-EGFP-G 48 h 后的情况。A 图右显示了由三个细胞系产生的病毒的不同稀释度在 BHK21-hACE2 细胞中的感染能力。B 图是 A 图右对应的 GFP 阳性细胞计数结果。
监测 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 感染 BHK21-hACE2 细胞后不同时间点的 EGFP 表达情况。
基于 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 的单克隆抗体的中和筛选。将 35 株单克隆杂交瘤细胞培养上清与 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 病毒共同孵育，然后将混合液加入 BHK21-hACE2 细胞中。通过绿色阳性的细胞数的减少情况判断抗体的中和效果。
本研究对携带 SARS-CoV-2 全长或截短 S 蛋白的 G 蛋白缺陷型水泡性口炎病毒 (VSVdG) 的假病毒包装效率以及不同细胞系用于假型病毒包装和感染的效率进行了评价。研究发现，VSV-SARS-CoV-2-Sdel18（C 末端截短 18 个氨基酸的 S 蛋白）的病毒包装和感染效率远高于 VSV-SARS-CoV-2-S。而在本研究所使用的细胞系中，稳定表达人 ACE2 的 BHK21-hACE2 对感染最敏感，Vero-E6 对感染也有中等程度的敏感性，BHK21 细胞对假病毒几乎不敏感。基于 VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 假病毒和 ACE2 过表达 BHK21 细胞 (BHK21-hACE2)，建立了抗体筛选和验证的中和分析模型。通过对 EGFP 阳性的细胞进行计数指征假病毒的感染情况，从而保证了高通量检测能力。研究表明，用 VSV-SARS-CoV-2-Sdel18 假病毒法测定 19 例恢复期患者血清中和效价，与 SARS-CoV-2 活病毒法测定结果有较好的相关性。同时评价了 7 种抗 SARS-CoV-2-S 受体结合区 (RBD) 中和小鼠单克隆抗体 (mAbs) 的中和活性。该模型的高效性可助力针对 SARS-CoV-2 的新药和疫苗研发。
Opera Phenix 系统作为本研究中的影像学数据采集和分析的工具，保障了模型的通量和筛选效率。
不同细胞系假病毒感染效率比较。比较携带 SARS-CoV-2 S 蛋白或 VSV G 蛋白的 VSVdG 病毒在 Vero-E6、BHK21、293T 和 BHK21-hACE2 细胞系中的感染效率。
VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 在不同细胞系中的包装效率比较。A 图左为各细胞感染 VSVdG-EGFP-G 48 h 后的情况。A 图右显示了由三个细胞系产生的病毒的不同稀释度在 BHK21-hACE2 细胞中的感染能力。B 图是 A 图右对应的 GFP 阳性细胞计数结果。
监测 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 感染 BHK21-hACE2 细胞后不同时间点的 EGFP 表达情况。
基于 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 的单克隆抗体的中和筛选。将 35 株单克隆杂交瘤细胞培养上清与 VSVdG-SARS-CoV-2-Sdel18 病毒共同孵育，然后将混合液加入 BHK21-hACE2 细胞中。通过绿色阳性的细胞数的减少情况判断抗体的中和效果。